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母血污染評估產前診斷標準化第一步
除去孕早、中期的流產、胎死宮內以外，約3-5%的出生嬰兒存在出生缺陷（包括身體結構或智力缺陷）。其中0.5%為染色體異常疾病，1.8%為單基因遺傳疾病，2.6%為多基因疾病。而在所有圍產期死亡中，先天性缺陷占20%-25%。在所有的活產兒染色體異常疾病中，以唐氏綜合征（21-三體綜合征）最為常見，其次是染色體18-三體綜合征和13-三體綜合征。孕期若孕檢（血清學、無創(chuàng)）高危、B超顯示有畸形或是高齡產婦的情況下，需對胎兒的染色體數(shù)目或結構異常進行產前診斷，避免有缺陷的患兒出生。對于單基因遺傳病，除了致死性的，一般都可正常分娩，但出生后，根據(jù)突變的基因表現(xiàn)出不同的疾病癥狀，如：先天性耳聾、假肥大性肌營養(yǎng)不良、血友病、脆性X、苯丙酮尿癥等等。在夫妻雙方一方有疾病發(fā)生（疾病是常染色體顯性或伴性遺傳?。┗螂p方已產下有先證者患兒的情況下，夫妻懷孕后，胎兒也需做單基因遺傳病方面的產前診斷，實現(xiàn)優(yōu)生優(yōu)育。
臨床上，一般產前診斷會根據(jù)孕期來選擇取胎兒細胞的方法，在孕早期可采用絨毛穿刺活檢術，孕中期可行羊水穿刺術，孕晚期可采集臍帶血。在采集這些標本時，無論選擇哪種采樣方式，都存在胎兒細胞在穿刺中受到母體細胞污染（maternal cells contamination, MCC）的可能。在自然流產后取胚胎絨毛做胚胎染色體檢測以查找病因時，也存在取到胎盤組織或母體蛻膜組織而污染胚胎絨毛的可能。而以上這些情況都有可能會產生錯誤的診斷結果而引起醫(yī)療糾紛。
研究發(fā)現(xiàn)，單胎妊娠MCC的發(fā)生率主要取決于取樣方式、施術者水平等。一般認為絨毛穿刺取樣術中MCC發(fā)生的風險大于羊膜腔穿刺羊水取樣術中MCC的發(fā)生率。有國外文獻報道指出，未經培養(yǎng)的孕中期羊水標本MCC發(fā)生率高達9.4%，經過培養(yǎng)的羊水標本MCC發(fā)生率達2.8%。
國內也有做過類似研究，河南省人民醫(yī)院在2011年10月至2012年1月期間對521例孕中期（18-26周）孕婦，58例孕早期（11-13周）孕婦，分別進行羊膜腔穿刺術或絨毛穿刺取樣術取得胎兒組織標本。在采用美國Promega公司STR系統(tǒng)對所有DNA標本進行STR分型檢測后發(fā)現(xiàn)，3.1%（16/519）未經培養(yǎng)的羊水標本存在MCC， 1.3%（7/519）培養(yǎng)后的羊水標本存在MCC；5%（3/57）未經培養(yǎng)的絨毛標本存在MCC， 其中1例完全為母親來源DNA而中途放棄培養(yǎng)，其他2例培養(yǎng)后仍然存在污染?？傮w上，如果不進行MCC排除將有0.6%的羊水標本和4%的絨毛標本得到錯誤的核型結果。在對19例未經培養(yǎng)的羊水和絨毛標本進行核型分析和染色體非整倍體的MLPA檢測后發(fā)現(xiàn)，MCC對正常女性胎兒核型分析無影響，并且MLPA結果也顯示無異常，而對男性胎兒MCC污染程度>10%的標本，核型分析有性染色體嵌合體的表現(xiàn)，并且染色體非整倍體MLPA分析結果表現(xiàn)為X染色體探針比例升高，提示X染色體拷貝數(shù)異?；騇CC。這4例男性胎兒在排除污染后再次分析均為正常男性胎兒，因此，在常規(guī)染色體核型分析中，MCC對于正常核型女性胎兒無明顯影響，但是卻增加了異常核型胎兒被誤判為異常/正常嵌合體或者男性胎兒被誤判為兩性嵌合體的風險。并且該研究再次顯示，即使是離心后非血性污染的羊水樣本仍可能存在MCC。
該研究對于單基因遺傳病還進行了體外模擬實驗，分別模擬10%、20%、30%（正常女性/患者基因組DNA的質量百分率）MCC對DMD基因外顯子缺失型MLPA檢測結果的影響。結果發(fā)現(xiàn)：10%的污染在MLPA檢測中即可有明顯反映，30%時DMD缺失型患者表現(xiàn)為雜合缺失。
研究發(fā)現(xiàn)，對于基于PCR原理的基因定性分析，10%MCC即可造成錯誤的分析結果；對于基因定量分析10%及以上的MCC即可能對分子遺傳學診斷結果產生干擾，30%MCC可能導致錯誤的診斷結果。一方面，產前診斷所涉及到的檢測方法，如：PCR、MLPA等技術都是檢測敏感度很高的檢測技術；另一方面，產前分子診斷的單基因遺傳病前設風險概率通常是25%或50%，并且母親是否為攜帶者、胎兒性別也會影響最終檢測的準確性。由此可見，分子遺傳學的產前診斷風險值遠高于最常見的細胞遺傳學疾病風險值。因此，產前分子遺傳學診斷的誤診風險也相應遠遠高于細胞遺傳學診斷，MCC對于分子遺傳學診斷結果的影響可能更為突出。
鑒于MCC對產前分子遺傳學診斷的巨大影響以及可能造成的嚴重后果，國際上對此也做了相應的規(guī)定。ACMG和加拿大醫(yī)學遺傳學協(xié)會，已經建議產前分子遺傳學診斷應當同時平行檢測母親和胎兒組織標本以排除MCC的潛在影響。2008年，英國臨床分子遺傳協(xié)會（CMGS）制訂了產前診斷標本分子檢測母體細胞污染的檢測規(guī)范。在規(guī)范中明確建議所有單基因病的產前診斷結果必須包括母體細胞污染的鑒別實驗。自2009年起,河南省人民醫(yī)院產前診斷中心在質量控制作業(yè)指導書中已經明確規(guī)定,所有核型結果為嵌合體的羊水標本或可疑MCC的絨毛標本必須進行MCC排除實驗(胎兒、母親STR分型或者改變取樣方案再次取樣核實）方可最終向患者出具報告。我國專家建議，產前分子遺傳學診斷應盡可能常規(guī)進行胎兒組織標本的MCC排除實驗。
MCC對產前分子遺傳學診斷會造成深遠的影響，對自然流產中流產物胚胎染色體異常檢測也會造成錯誤的診斷結果。Lathi RB 和他的同事在對1222個流產分析樣本進行回顧性MCC檢測后發(fā)現(xiàn)，原本結果為592例染色體非整倍體，630例正常核型，進行MCC檢測后發(fā)現(xiàn)，在630例正常核型的樣本中有269例46，XX的樣本中沒有發(fā)現(xiàn)胚胎組織，即這269例其實并不是胚胎樣本而是母體樣本。在排除這269例母體樣本后，染色體異常的概率從48%上升到了62%。該研究證實，加入母血評估可使流產絨毛染色體檢測的結果更準確。
天昊診斷的人類個體識別檢測體系采用多重熒光PCR擴增法依托一代測序儀進行毛細管電泳，共檢測17個位點，其中包含10個常見的個體鑒別基因座，6個具有高雜合度的基因座和1個性別基因座?？捎糜诋a前診斷的早期絨毛膜、羊水和臍帶血及自然流產原因排查時用到的刮宮組織、流產組織的母血污染評估，以避免在產前診斷中由于母血污染而造成錯誤的診斷結果，引起不良的生產結局而導致醫(yī)療糾紛。還可避免在自然流產原因排查時，由于母血污染導致的檢測結果錯誤，造成病人接受不必要的其他檢查和錯誤的治療方案。
天昊診斷利用眾多自主研發(fā)的專利技術（iMLDR®多重SNP及突變分析技術，SNPscan®高通量SNP及突變分析技術，AccuCopy®多重基因拷貝數(shù)檢測技術，CNVplex®高通量基因拷貝數(shù)檢測技術，CNVseq®超高通量基因拷貝數(shù)檢測技術，以及EasyTarget®多重基因片段快速富集技術等）致力于優(yōu)生優(yōu)育診斷領域的篩查和診斷。檢測產品涵蓋了孕前、產前、新生兒等不同階段的出生檢測，以求逐步降低出生缺陷的發(fā)生率。檢測產品包括：新無創(chuàng)TM唐氏綜合征產前篩查、染色體非整倍體基因檢測、染色體微缺失微重復突變檢測、男性不育相關基因突變檢測、遺傳性耳聾90項基因突變檢測、孕前夫婦基因突變攜帶者篩查、新生兒遺傳病基因篩查以及一些罕見的遺傳病檢測（包括：地中海貧血、血友病、假肥大型肌營養(yǎng)不良等）。天昊診斷將以“創(chuàng)新基因科技，引領診斷革新”為宗旨，利用公司各項創(chuàng)新基因檢測技術及高素質的服務團隊，為促進分子診斷水平發(fā)展、提升我國人口健康素質做出貢獻！
參考文獻：
1. 侯巧芳，廖世秀，李濤，楊艷麗，張朝陽，楚艷麗 產前診斷標本的母體細胞污染及其影響，中華婦產科雜志2013年2月第48卷第2期
2. 張清健，鄭立新，田佩玲，葉嘉玲，楊衛(wèi)，王柏賢，徐珊珊，周冰燚，蔡慧娜，方俊宇，朱志勇 短串聯(lián)重復序列連鎖分析進行產前診斷前母血污染鑒定的研究 中國實驗診斷學 2015年5月 第19卷 第5期
3. Lathi Rb et al .,Reliability of 46,XX results on miscarriage specimens: a review of 1,222 first-trimester miscarriage specimens, Fertil Steril. 2014 Jan;101(1):178-82